原位杂交FISH、IF双标

服务介绍：

荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization，FISH）是20世纪80年代末在放射性原位杂交技术基础上发展起来的一种非放射性分子生物学和细胞遗传学结合的新技术，是以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法。IF即免疫荧光，可检测组织或细胞中某蛋白的表达情况及定位。

原位杂交（FISH、IF双标）可以检测靶基因与靶蛋白的共定位情况。

主要用途：

荧光原位杂交技术目前被广泛应用于染色体畸变，如非整倍体、染色体重组。荧光原位杂交技术在基因定性、定量，整合、表达等方面的研究中颇具优势，目前已被广泛应用于遗传病诊断、病毒感染分析、产前诊断、肿瘤遗传学和基因组研究等许多领域，在临床检验、教学和研究等方面扮演着重要角色。

检测原理：

FISH检测原理是将荧光素直接或间接标记的核酸探针[或生物素、地高辛、dinit rophenyl(I) NP、aminoacetylAAFfluorine（AAF）等标记的核酸探针与待测样本中核酸序列按照碱基互补配对的原则进行杂交，经洗涤后直接在荧光显微镜下观察。

实验流程：

荧光探针流程：组织固定-脱水-切片-石蜡切片脱蜡至水-打孔液孵育-蛋白酶K消化-预杂交-洗涤-杂交-洗涤-孵育一抗-孵育二抗-DAPI染核-洗涤-封片-镜检。

实验结果：

小鼠 结肠 Eub338(Cy5)+MUC2(Green)

样本要求及运输条件：

1、提供固定合格的样本。组织离体后，立即放入10%NBF或4%多聚甲醛固定液中，固定液需用DEPC水配制，在室温下固定16-32小时。固定时间少于16小时或长于32小时都会影响实验结果。石蜡切片常温运输。

2、新鲜冰冻组织样本取材后直接用OCT包埋，然后以10-20μm厚度进行切片。切片可以在-80℃保存至多3个月，在此步骤前不要对组织使用任何固定剂（乙醇或甲醛）。切片于干冰中运输。

3、固定组织做冰冻切片，样本取材后应立即放到新鲜制备的4%PFA中，4℃固定24小时。切片于-20℃运输。

4、细胞爬片用原位杂交固定液固定15分钟后，换无酶PBS，密封，4℃运输。

5、探针于干冰中运输至公司。

注意事项：

1、客户需提供探针及杂交靶目标（mRNA，LncRNA，circRNA，miRNA，DNA），探针包括目的探针、阳性对照探针及阴性对照探针。

2、若客户探针有对应的杂交缓冲液，请客户提供。若无，则使用公司所用的通用杂交缓冲液（北京天恩泽基因科技有限公司超级杂交液）。

3、原位杂交实验一般先做预实验然后进行正式实验，因为核酸容易降解，因此前期样本处理有特定要求，具体可与公司沟通。

4、原位杂交实验所用的超纯水、载玻片等实验器具均需要高压灭菌。若为关于RNA的原位杂交，则需要加入DEPC进行高压灭菌.

5、客户提供准确的一抗名称、品牌货号，若提供一抗为特殊来源，需提供相应二抗。

6、正式实验的趋势我司不做保证。