EDU染色（细胞爬片）试验报告

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EdU染色（细胞爬片）

一、实验器材及试剂

1、实验器材

2、主要试剂及货号

二、实验步骤

1、细胞爬片固定：未经固定的细胞用4%多聚甲醛固定10分钟。已固定的细胞室温放置10分钟，TBS清洗。用组化笔在爬片边缘画圈。

2、破膜：用0.1%Triton®X-100破膜15分钟。TBST洗3次，每次5分钟。

孵育：参考下表配制EDU反应液。取足够量新鲜配好的染液以覆盖住细胞，每张切片滴加50-100μl（视细胞爬片大小而定），4℃孵育过夜。注意：请严格按照下表中组分顺序和体积配制Click反应液，否则点击反应可能无法有效进行；

1、同时，Click反应液须在配制后15分钟内使用。

2、染核：第二天从冰箱拿出切片，置于室温放置15分钟（复温），用TBST冲洗3次，再浸洗3次，每次3分钟。除去TBST，每张爬片滴加50-100μl（视细胞爬片大小而定）DAPI工作液（用DAPI原液1:500配制），避光染核5分钟后，用TBST冲洗。

3、封片：用荧光封片剂封片，4℃避光保存。

4、镜检：显微镜下镜检，图像采集分析。

一、结果判读

DAPI通道细胞核为蓝色，647通道细胞核呈紫红色。

二、注意事项

1、冲洗时不应直接将TBST对准爬片，应将喷壶嘴对准孔板壁让水顺板壁流下，避免将爬片上的细胞冲洗掉。

2、实验过程中注意做好标记，在培养皿侧面画上标记，避免将爬片弄混，每个孔的爬片、孔板与孔板盖都应做好标记。

3、样本需要经EdU孵育处理。